纸片扩散法（K-B法）药敏试验操作指南与结果判读

一、纸片扩散法vs.肉汤稀释法——如何选择？

在临床微生物实验室中，常用的药敏试验方法包括纸片扩散法（Kirby-Bauer法）和肉汤稀释法，两者各有优势：

选择建议：

-常规药敏试验（如尿路感染、伤口感染）优先使用纸片扩散法，操作简单且成本低。

-特殊耐药菌检测（如肺炎链球菌、MRSA）或科研需求推荐肉汤稀释法，可获取精确MIC值。

二、标准操作流程（纸片扩散法）

1.菌液制备

挑取纯培养菌落，用无菌生理盐水或肉汤调配至0.5麦氏浊度。

2.接种与贴片

用无菌棉签均匀涂布菌液于MH琼脂表面（厚度4mm）。

静置5分钟后，用无菌镊子贴上抗菌药物纸片，间距≥24mm（避免抑菌圈重叠）。

3.孵育条件

36±1℃孵育18-24小时。

4.结果判读

使用游标卡尺测量抑菌圈直径（精确到0.02mm），对照CLSI标准判定敏感性。

三、如何通过抑菌圈大小判定抗药性？

抑菌圈直径与细菌耐药性的关系：

注：具体判读标准请参考最新版CLSIM100文件，不同菌种-药物组合的折点可能不同。

四、注意事项

1.质控要求

-每批次试验需用标准质控菌株（如大肠埃希菌ATCC25922）验证培养基和纸片性能。

2.常见问题

-抑菌圈不圆→可能因琼脂不平或接种不均。

-结果重复性差→检查菌液浓度、孵育温度及湿度。

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